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如何提高電轉(zhuǎn)效率？
2023-09-14
電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA、mRNA等）導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)，來(lái)改變細(xì)胞的特性，從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的，是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么該如何提高電轉(zhuǎn)效率呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞收集時(shí)：1)在消化貼壁細(xì)胞時(shí)，一定要注意終止胰酶反應(yīng)，防止過度消化；最好使用專業(yè)的胰酶中和劑；2)在進(jìn)行細(xì)胞離心時(shí)，使用低轉(zhuǎn)速長(zhǎng)時(shí)間離心，提升細(xì)胞的存活率；3)選擇合適狀態(tài)的細(xì)胞，一般原代細(xì)胞可以傳1-2次后使用；盡量挑選迭代次數(shù)少...
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貼壁細(xì)胞培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別是什么？
2023-09-13
細(xì)胞培養(yǎng)有兩種基本方式，一種是人工基質(zhì)上的單層細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)），另一種是在培養(yǎng)基中自由漂浮（懸浮培養(yǎng)）。那么你知道貼壁細(xì)胞培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！來(lái)自脊椎動(dòng)物的大多數(shù)細(xì)胞，除了造血細(xì)胞系和少數(shù)其他細(xì)胞系，都是貼壁依賴性的，必須在經(jīng)過專門處理以允許細(xì)胞粘附和擴(kuò)散的合適基質(zhì)上培養(yǎng)。然而，許多細(xì)胞系也適用于懸浮培養(yǎng)。同樣，大多數(shù)市售昆蟲細(xì)胞系在貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)中生長(zhǎng)良好。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞可以保存在未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶中，但隨著培養(yǎng)體積與表面積的增加...
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什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線？
2023-09-13
你知道什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)，和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線嗎？，讓我們一起來(lái)看看吧！一、原代細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首ci培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)離體時(shí)間短，遺傳性狀和體內(nèi)細(xì)胞相似，適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。最chang用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。二、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是測(cè)定細(xì)...
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熒光定量PCR的原理是什么？
2023-09-12
熒光定量PCR（Real-timePCR），是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè),最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道熒光定量PCR的原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！以探針法熒光定量PCR為例：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開始時(shí)，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)...
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細(xì)胞傳代的實(shí)驗(yàn)步驟是什么？有何注意事項(xiàng)？
2023-09-12
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，去除原培養(yǎng)基并將細(xì)胞從原培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基中，維持細(xì)胞的活力與增殖。細(xì)胞傳代既可以擴(kuò)大細(xì)胞培養(yǎng)量，也能夠避免細(xì)胞因進(jìn)入平臺(tái)期而出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制甚至死亡的情況。那么你知道細(xì)胞傳代的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？有何注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、實(shí)驗(yàn)步驟1.貼壁細(xì)胞的傳代:1)倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及密度，評(píng)估細(xì)胞的狀態(tài)，以作為傳代比例的參考。2)提前紫外殺菌（至少30min為宜）操作臺(tái)及實(shí)驗(yàn)材料。3)注意無(wú)菌操作，在操作臺(tái)中吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)舊培養(yǎng)液（盡可能去...
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如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)？
2023-09-11
在蛋白表達(dá)系統(tǒng)的相關(guān)研究中，從頭合成蛋白質(zhì)并不是一個(gè)可行的選擇。因此需要借助活細(xì)胞或細(xì)胞器用作生產(chǎn)和構(gòu)建蛋白質(zhì)的工廠。那么你知道該如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！目前，較為主流的表達(dá)宿主有大腸桿菌（E.coli）、畢赤酵母（P.pastoris）、昆蟲-桿狀病毒（Bac-to-Bac系統(tǒng)）以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞系（CHO、HEK293）等。一、細(xì)菌優(yōu)點(diǎn)：1.遺傳背景清楚；2.繁殖快、成本低、抗污染能力強(qiáng)；3.表達(dá)量高、表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好；4.商品化的載體...
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你知道胎牛血清的用途和應(yīng)用領(lǐng)域嗎？
2023-09-11
胎牛血清是從胎牛臍帶血中提取的一種生物制品。它是一種黃褐色液體，主要由蛋白質(zhì)、氨基酸、碳水化合物、脂類、礦物質(zhì)和生長(zhǎng)因子等組成。那么你知道胎牛血清的用途和應(yīng)用領(lǐng)域嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞和組織培養(yǎng)：胎牛血清是常用的培養(yǎng)基補(bǔ)充物之一，提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子和調(diào)節(jié)因子。它能夠維持細(xì)胞的適宜環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化，并提高細(xì)胞產(chǎn)量和特定細(xì)胞類型的功能。二、疫苗和生物制品生產(chǎn)：胎牛血清在疫苗、抗體和生物藥物的生產(chǎn)過程中起著重要的作用。它可以作為培養(yǎng)基的補(bǔ)充物，...
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哪些因素影響電轉(zhuǎn)效率？
2023-09-08
電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA、mRNA等）導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)，來(lái)改變細(xì)胞的特性，從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的，是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么影響電轉(zhuǎn)效率的因素有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、電轉(zhuǎn)過程1）電轉(zhuǎn)的完整操作步驟包括電轉(zhuǎn)前操作，電轉(zhuǎn)執(zhí)行和電轉(zhuǎn)后培養(yǎng)。在進(jìn)行電轉(zhuǎn)前操作時(shí)，電轉(zhuǎn)試劑、細(xì)胞與轉(zhuǎn)染底物要進(jìn)行混勻，如果混勻時(shí)過于激烈，會(huì)破壞轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低；2）在進(jìn)行電轉(zhuǎn)前操作時(shí)，電擊緩沖液的選擇...
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